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奥林巴斯显微镜荧光通道的校准方法有哪些？


  1. 光源校准（保障荧光激发稳定性）

    奥林巴斯部分荧光显微镜用汞灯，也有 BX43 这类用 LED 光源的机型，核心是保证光源发光均匀、光路对准。以汞灯为例，先开启汞灯预热，在载物台放一张白纸，转出物镜让光轴对准空孔；选透过绿光的滤光片组，转动聚光镜调焦旋钮让汞灯光弧在白纸上成像；再调节汞灯和反光镜调节旋钮，使白纸上的两个光弧重合，最后微调聚光镜得到均匀的光弧像。若为 LED 光源，可借助仪器自带的光强度管理功能，校准不同倍率切换时的照明强度一致性。

  2. 滤色镜与光路校准（确保荧光过滤精准）

    滤色镜是荧光通道的核心部件，需校准其与光路的同轴性。先安装对应荧光标记的标准滤色镜组，将荧光标准样品（如 GFP 标记标准片）放在载物台；通过目镜或成像系统观察，若荧光信号偏移、边缘模糊，微调滤色镜座的固定螺丝，让荧光光斑居中；切换不同滤色镜组时，逐一确认各通道荧光信号无串扰，若有信号干扰需检查滤色镜是否污染或老化，及时清洁或更换。

  3. 软件与参数校准（优化成像准确性）

    • 白平衡校准：像 BX51 等机型，在荧光模式下需将聚焦框缩小到荧光区域，再通过软件选择一键接触式或周边区块选择模式完成白平衡校正，避免荧光图像色彩偏差。

    • 成像参数校准：对于带成像软件的机型（如搭配 DP 系列相机的机型），进入 Acquire 菜单的 Calibrations 选项；用荧光标准样品拍摄，调整曝光时间、增益等参数，确保标准样品的荧光强度在软件检测范围内线性显示；若不同倍率下荧光亮度差异大，可借助仪器的光强度管理功能，校准倍率切换时的参数适配性。

  4. 辅助光阑校准（提升信噪比）

    采用柯勒照明的机型需校准孔径光阑和视场光阑。先对焦荧光样品，打开孔径光阑至最大，关小视场光阑，调节聚光镜使视场光阑边缘清晰并居中，再调大视场光阑至略大于目镜视场；最后减小孔径光阑至成像反差最佳（通常为最大开度的 70%），减少杂光对荧光信号的干扰。

 https://industrial.evidentscientific.com.cn/zh/microscope/

 
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